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Exon Trapping ist eine Methode um die informationstragenden Teile der DNA die Exons im Labor nachzuweisen und von den nichtinformationstragenden Teilen den Introns zu unterscheiden Ubersicht uber das Exon Trapping Vom dargestellten Plasmid wird eine RNA transkribiert die ein Intron blaue Linie flankiert von zwei Exons gelbe Kasten enthalt Durch Splicing wird das Intron entfernt Befindet sich nun eine beliebige zusatzliche DNA Sequenz im Plasmid die ein weiteres Exon oranger Kasten mit flankierenden Sequenzen orange Linie enthalt so kann dieses im spateren Produkt gefangen und identifiziert werden daher trapping Die algorithmische Voraussage von Exons auf Grundlage von durch DNA Sequenzierung gewonnener Daten stellt sich als ausserst schwierig dar da die Grenzen der Exons und Introns die sogenannten splice sites stark degeneriert sind Zudem beeinflussen weitere cis Elemente so genannte Splicing Enhancer oder Splicing Silencer das Prozessieren der Primartranskripte vgl auch Splicing Wegen dieser Probleme wurde die Methode des Exon Trappings entwickelt um Exons experimentell nachweisen zu konnen Grundlage dafur ist ein Plasmid das nach Einbringen vgl Transfektion in eukaryotische Zellen zur Expression einer RNA fuhrt Diese RNA enthalt selber ublicherweise ein Intron was die Zelle dann im Zuge des Splicings entfernt Um ein Exon oder einen Teil davon zu finden konnen nun wahllos DNA Fragmente in dieses Intron des Plasmids kloniert werden Befindet sich ein Exon oder Teile davon in diesem DNA Fragment so erkennt dies die zellulare Maschinerie und berucksichtigt es beim Splicing Dies fuhrt dazu dass das Exon schliesslich im fertigen Produkt gefunden und daraus sequenziert werden kann vgl nebenstehende Abbildung Nachteile Zum einen stellt das Klonieren der DNA Fragmente in den Vektor und die spatere Analyse einen zum Teil nicht unerheblichen Arbeitsaufwand da Zum anderen werden Exons oder Teile davon aus dem naturlichen Kontext gerissen was unter anderem dazu fuhren kann dass wichtige Elemente wie Splicing Enhancer verloren gehen und Exons nicht immer zuverlassig erkannt werden Es gibt eine Reihe von Abwandlungen dieser Exon Trapping Vektoren prinzipiell beruht aber das Prinzip auf der oben geschilderten Theorie Aufgrund der umfangreichen cDNA und EST Datenbanken die mittlerweile entstanden sind verliert das Exon Trapping zunehmend an Bedeutung Abgerufen von https de wikipedia org w index php title Exon Trapping amp oldid 229072480