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Der Comet Assay auch Einzelzellgelelektrophorese genannt ist eine Technik der Gelelektrophorese durch die es ermoglicht wird DNA Schadigungen in einzelnen Zellen festzustellen Entwickelt wurde der Assay 1984 von Ostling und Johanson zum Nachweis von DNA Doppelstrangbruchen Mit der Weiterentwicklung durch Singh im Jahre 1988 konnten durch die Verwendung von basischen Puffern zusatzlich auch DNA Einzelstrangbruche festgestellt werden Das Prinzip des Comet Assays beruht darauf dass Zellen in Agarose eingebettet lysiert und einem elektrischen Feld ausgesetzt werden der so genannten Elektrophorese Wahrend der Elektrophorese wandert die negativ geladene DNA zum Pluspol und dank der Poren in der Agarose trennen sich die Bruchstucke der Grosse nach auf da die kleineren Bruchstucke in bestimmter Zeit eine weitere Strecke zurucklegen als die grosseren Chromosomale DNA ist jedoch zu gross um als Ganzes im elektrischen Feld zu wandern Nur geschadigte bruchstuckhafte DNA ist hier in der Lage aus dem Zellkern herauszuwandern Unter dem UV Mikroskop erscheinen die beschadigten Zellen welche vorher mit Fluoreszenzfarbstoffen wie Ethidiumbromid angefarbt wurden nun mit einem Schweif aus DNA Bruchstucken der ihnen das Aussehen eines Kometen gibt Beim Comet Assay konnen alle Zellen verwendet werden die einen Zellkern besitzen Die Durchfuhrung des Comet Assays ist relativ einfach und schnell Ausgewertet wird die Zahl der geschadigten und ungeschadigten Zellkerne entweder von Hand oder durch spezielle Computerprogramme mit visueller Erfassung densitometrisch Weblinks BearbeitenInternational Comet Assay Working Group ICAWG Molekulare Grundlagen und Anwendungsmoglichkeiten des Comet Assay in Pflanzen Sigmaaldrich comet assay Optimierung des Comet Assay fur den Einsatz im Biomonitoring Abgerufen von https de wikipedia org w index php title Comet Assay amp oldid 226289940