Das Split-TEV (‚Gespaltenes TEV‘) ist eine biochemische Methode zum Nachweis von Protein-Protein-Interaktionen in lebenden Zellen.
Prinzip Bearbeiten
Das Split-TEV ist als Protein-fragment complementation assay eine Methode zum Nachweis einer Bindung durch Komplementation von Fragmenten eines Reporterproteins (englisch protein complementation assay, PCA), wie auch die bimolekulare Fluoreszenzkomplementation. Das Split-TEV besteht aus einer NIa-Protease des Tobacco Etch Virus (TEV-Protease), die in zwei enzymatisch inaktive Teile zerlegt wurde. Je ein Teil (das N-terminale NTEV oder das C-terminale CTEV) wird an die beiden zu untersuchenden Proteine als Fusionsprotein angehängt, wodurch bei einer Bindung der beiden Proteine die angehängten Protease-Teile rekonstituiert und die Protease enzymatisch aktiv wird.
Literatur Bearbeiten
- Michael C Wehr, Lisa Reinecke, Anna Botvinnik, Moritz J Rossner: Analysis of transient phosphorylation-dependent protein-protein interactions in living mammalian cells using split-TEV. In: BMC Biotechnology. 8. Jahrgang, 2008, S. 55, doi:10.1186/1472-6750-8-55, PMID 18620601, PMC 2483975 (freier Volltext).
- Minou S. Djannatian, Sabrina Galinski, Tobias M. Fischer, Moritz J. Rossner: Studying G protein-coupled receptor activation using split-tobacco etch virus assays. In: Analytical Biochemistry. 412. Jahrgang, Nr. 2, 2011, S. 141–52, doi:10.1016/j.ab.2011.01.042, PMID 21295005.
Einzelnachweise Bearbeiten
- M. C. Wehr, R. Laage, U. Bolz, T. M. Fischer, S. Grünewald, S. Scheek, A. Bach, K. A. Nave, M. J. Rossner: Monitoring regulated protein-protein interactions using split TEV. In: Nature methods. Band 3, Nummer 12, Dezember 2006, S. 985–993, ISSN 1548-7091. doi:10.1038/nmeth967. PMID 17072307.